三七是我國重要的藥用植物之一,又名田七,人參三七等,為五加科人參屬植物,是我國傳統(tǒng)名貴藥物,自古就有“止血神藥”的美稱。距今已有400多年的應(yīng)用歷史,在國內(nèi)外久負(fù)盛名。三七主產(chǎn)于云南文山。品種缺乏是三七種植存在的重要技術(shù)問題,育種標(biāo)記和方法則是困擾三七育種的重要問題,這與我們對三七的遺傳基礎(chǔ)缺乏了解有關(guān)。
研究發(fā)現(xiàn),三七是在9100萬年前與茄科植物馬鈴薯和辣椒分化開來,三七與四倍體的人參屬植物人參和西洋參有9383個共同的基因,976個特有的轉(zhuǎn)錄本.,基因組測序的完成將為三七全基因組選擇育種、功能基因的發(fā)現(xiàn)等提供了基礎(chǔ),也有利于三七產(chǎn)業(yè)關(guān)鍵技術(shù)問題的解決。
三七樣品中提取DNA,中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院之前采用研缽手工研磨的方法,在研缽內(nèi)倒入液氮,在凍干狀態(tài)下快速研磨,研磨過程中樣品不易研磨,整體研磨樣品不充分,影響實驗效果,因此選擇上海凈信冷凍組織研磨儀。
實驗材料和器具:
樣品:三七
工具:凈信冷凍組織研磨儀(JXFSTPRP-CL-24)
耗材:鋼罐,研磨珠、液氮、剪刀、鑷子等
實驗步驟:
1、準(zhǔn)備鋼罐2個,研磨珠若干顆;
2、取三七組織剪成小塊與研磨珠一同放入鋼罐中,將蓋子擰緊;
3、將鋼罐置于裝有液氮的容器內(nèi),液氮容量沒過鋼罐即可,冷凍若干分鐘,取出時戴手套或使用鑷子夾取避免液氮凍傷;
4、將適合器放入研磨儀器中固定好,然后開機并將制冷功能打開進(jìn)行預(yù)冷
5、將浸泡過液氮的鋼罐放置適合器內(nèi),樣品盡量對稱放置,以保證研磨時的受力平衡,旋緊垂直定位螺旋,將安全鎖扣緊。設(shè)置參數(shù),程序結(jié)束后即可得到破碎粉末;
6、研磨完畢后請關(guān)閉電源,將安全鎖歸位;
7、完成后續(xù) DNA 提取步驟。
注意事項:
1、每支鋼罐內(nèi)的樣品量一般不超過罐體體積的三分之二,樣品量過多會影響研磨效果。
2、樣品盡量對稱放置,以保證研磨時的受力平衡。
3、樣品夾取過程中戴手套及使用鑷子夾取避免液氮凍傷。
實驗過程、結(jié)果圖示:
實用儀器介紹:
此款儀器為上海凈信實業(yè)發(fā)展有限公司生產(chǎn)的全新全自動樣品冷凍研磨儀,它是一種特殊的、快速的、高效率的、多試管的一致系統(tǒng)??梢栽谳^短的時間內(nèi)、 低溫狀態(tài)下完成對各種樣品的研磨、粉碎、混合及細(xì)胞破壁,以保留蛋白質(zhì)活性。